ОКИСЛИТЕЛЬНЫЕ ФЕРМЕНТЫ

ОКИСЛИТЕЛЬНЫЕ ФЕРМЕНТЫ
ОКИСЛИТЕЛЬНЫЕ ФЕРМЕНТЫ, группа ферментов, обусловливающих окислительные процессы, идущие в растительных и животных клетках как при их жизни, так и первое время после разрушения протоплазмы. Наиболее важным с биол.точки зрения О. процессом живой клетки является дыхание, при к-ром органич. вещества окисляются за счет 02 воздуха до конечных продуктов распада (С02 и воды). Еще Лавуазье указал, что этот процесс аналогичен горению. Но тогда как горение может осуществляться только при очень сильном разогревании органических веществ, дыхание происходит при сравнительно низких температурах. Поэтому его нужно отнести к группе весьма распространенных в природе явлений, обычно называемых «самопроизвольным окислением» или «медленным сгоранием». Указанные процессы совершаются с заметной скоростью только в присутствии особых ускорителей—катализаторов. На необходимость наличия в живой клетке такого рода катализаторов—О. ф.—-указал еще ШенбеЙн (Schonbein). Он считал, что без этих ферментов «животные задыхались бы в океане чистого 02, как в пустом пространстве». Впервые О. ф. был выделен японским ученым Иошидой (Н. Yoshida) из сока лакового дерева, поэтому он и получил название лакказы. Бертран (G. Bertrand), подробно изучивший лакказу, показал, что аналогичные ферменты существуют и в других растительных объектах. Он объединил все эти ферменты, окисляющие в присутствии атмосферного 02, под общим названием «оксидазы». Бах совместно с Шода (R. Chodat) подверг эти ферменты детальному исследованию. На основании полученных им данных он построил теорию, согласно к-рой действие оксидаз базируется на активировании атмосферного 02. При этом возникают промежуточные перекисные- соединения органических веществ и перекись водорода. Последняя в присутствии особого О. ф. «пероксидазы» может быть использована живой клеткой для дальнейшего окисления органических веществ. Однако ни оксидаза ни пероксидаза не могут окислять ни углеводов, ни белков, ни жиров. Бах и ТТТода рядом тщательных опытов доказали, что действие этих ферментов распространяется только на следующие вещества: фенолы, ароматические амины и иодистоводородную к-ту. Ни одно из этих соединений не является материалом, окисляемым в процессе дыхания. Следовательно наличие в клетке оксидаз еще не может обусловить собой процесса дыхания. Высказывалось даже мнение (P. Portier), что оксидазы вообще не являются «дыхательными ферментами» и что их роль сводится только к защитному действию, к образованию веществ, препятствующих проникновению микроорганизмов - в пораненную ткань. Но эта точка зрения оказалась неверной, и в наст, время с полной отчетливостью установлена та выдающаяся роль, которую играют оксидазы при витальном окислении. Дыхание является сложным процессом, состоящим из ряда отдельных связанных и координированных между собой хим., реакций. Обусловленное оксидазами окисление является только одним из звеньев этой длинной цепи явлений. Поэтому и не удается при помощи одних оксидаз воспроизвести все явление в целом. Другим чрезвычайно важным звеном дыхательного процесса являются совершающиеся внутри живой клетки окислительно-восстановительные реакции. Еще Траубе (М. Traube) показал, что окисление может осуществляться не только за счет свободного 02 воздуха, но и за счет связанного 02, в частности 02 воды. Простейшим примером такого гидролитического окисления может служить окисление щелочных металлов, идущее за счет гидроксилов воды с выделением соответствующего количества Н в виде газа: 2Na+2H20 = 2NaOH + H2. Но такого рода реакция может произойти лишь в том случае, когда окисляющееся тело обладает достаточным запасом энергии,чтобы само по себе разлагать воду. Обычно окисления за счет элементов воды происходят путем сопряженных реакций, при к-рых из двух тел, неспособных в отдельности разлагать воду, одно связывает 02 воды, другое Н. Напр. металлический цинк в отсутствии воды совершенно не окисляется 02 воздуха и сам по себе не разлагает воды. Но если взбалтывать цинк с водой и 02, металл соединяется с гидроксилом воды, давая гидрат окиси цинка, а Н воды с молекулой О2 образует перекись водорода Другим примером такого же рода окислительно-восстановительных реакций, идущих за счет элементов воды, может служить реакция Каниццаро (Cannizzaro) (см. Каниц-царо реакция), к-рая сводится к одновременному восстановлению и окислению альдегидов, идущему в присутствии щелочи. + 1 + I = RCHO ОН ОН RCOOH+H20. В указанном случае одна молекула альдегида окисляется гидроксилом воды в соответствующую к-ту, в то время как другая восстанавливается водородом в спирт. In vitro эта реакция может итти только в щелочном растворе, но в живой клетке она осуществляется и в нейтральной среде благодаря присутствию здесь особых окислительно-восстановительных ферментов (окси-доредуказ). Впервые с полной определенностью действие этих ферментов было обнаружен© Шардингером (F. Schardinger) в молоке. Шардингер показал, что смесь муравьиного альдегида и метиленовой сини в водном растворе в несколько минут обесцвечивается свежим молоком. Кипяченое молоко остается бездеятельным. В дальнейшем было установлено, что мы имеем здесь окислительно-восстановительный процесс, идущий за счет элементов воды. При этом альдегид окисляется в соответствующую к-ту, а ме-тиленовая синь восстанавливается в бесцветное лейкосоединение. Метиленовая синь и муравьиный альдегид могут быть заменены и другими веществами (напр. другими альдегидами, аминокислотами, пуриновыми основаниями, с одной стороны, и различными красителями, нитратами, тиосоеди-нениями—с другой). От этого характер реакции не изменяется. Бах на основании ряда соображений назвал этот фермент молока «пергидридазой». Аналогичные ферменты были обнаружены и в других растительных и животных материалах. В наст. время можно предполагать, что оксидоре-дуказы присутствуют во всех без исключения живых клетках. Биол. роль этих ферментов громадна. Именно благодаря им в живой клетке осуществляется первичное окисление разнообразных органических веществ (в частности дыхательных материалов). Углеводы, жиры, белки и их продукты распада не могут непосредственно окисляться 02 воздуха. Это окисление идет по указанной выше схеме за счет гидроксила воды. Однако, как мы уже раньше видели, такого рода окисление осуществляется только в том случае, когда одновременно с ним происходит восстановительный процесс, при помощи к-рого удаляется Н воды. В живой клетке эту роль уловителей, акцепторов водорода могут играть весьма разнообразные соединения. В частности при брожении восстановлению подвергаются различные продукты распада углеводов (например альдегиды). В результате этого в указанном процессе обязательно образуются продукты восстановления—спирты, метан и даже в некот©-рых случаях Н. Атмосферный 02 не играет здесь никакой роли, и поэтому ряд брожений может осуществляться и при полном его отсутствии. Иначе обстоит дело в процессе дыхания. Здесь акцептирование водорода совершается особым механизмом, в к-ром далеко не последнюю роль играют оксидазы. Как показали многочисленные исследования В. Пал-ладина и др. авторов, в клетках растений и животных наряду с оксидазами присутствуют и те вещества, которые могут окисляться при содействии этих ферментов,— полифенолы. Т. о. аэробное окисление и в частности дыхание клетки совершаются по еле- дующей схеме: кислород воздуха при воздействии- оксидаз окисляет «дыхательные хромогены» — веществагтипа многоатомных фенолов. При этом образуются подобные хинону соединения, т. н. «дыхательные пигменты». Последние обладают способностью связывать Н воды и обратно восстанавливаться в хромоген, в то время как гидрок-сил воды идет на окисление разнообразных органических веществ (углеводов, аминокислот и пр.). Окисление этих веществ и сопряженное с вим восстановление пигментов осуществляется в живой клетке только благодаря наличию оксидоредуказ. Повидимо-му значительно бблыную роль, чем указанные В. Палладиным полифенолы, играет в качестве акцептора и переносчика кислорода как в растительных (дрожжи, бактерии), так особенно в животных клетках дериват гемина — открытый Мак Менном (Mac Munn) гистогематин, или цитохром (Кейлин), содержащийся во всех без исключения клетках, обладающих аэробным обменом. Цитохром легко переходит из окисленной формы в восстановленную и обратно. Так как эти формы отличаются по \-своим спектральным свойствам, то за ихъзаимным переходом—и т. о. до известной степени за дыханием клетки—можно следить непосредственно глазом, не нарушая даже целости клетки. Цитохром легко восстанавливается водородом органических молекул, активированным дегидразами (см. ниже), или, если придерживаться схемы гидролитического окисления, :водородом воды под влиянием оксидоредуказ. В свою очередь восстановленный цитохром под влиянием специальной оксидазы, отличающейся по нек-рым свойствам от обычных фенолаз, снова окисляется в исходную форму кислородом воздуха. Искусственно составленная из своих компонентов система цитохром+оксидаза обнаруживала в опытах Кейлина полное сходство с естественным дыхательным ферментом. Следовательно в процессе дыхания принимают участие две-дхатегории ферментов: во-первых оксидазы—ферменты, обусловливающие образование акцепторов Н (дыхательных пигментов), и«о-вторых оксидоредуказы—ферменты, ускоряющие окислительно-восстановительные процессы, идущие за счет элементов воды. Это деление окислительных ферментов на две группы представляется вполне обоснованным как с химической, так и с биол. точки зрения. Однако не все авторы согласны с изложенной выше схемой дыхания. В частности Виланд (Н. Wieland) полностью отрицает активирование атмосферного 02. По его мнению всякое окисление органических веществ в живой клетке начинается с гидратирования этих веществ, с присоединения целой молекулы воды.-В дальнейшем от полученных т. о. гидратов ^отнимается водород, происход'ит'детидрирование, в результате которого мы получаем соединения более окисленные, чем исходные вещества. Как пример такого процесса Виланд приводит реакцию' окисления СО в *С02 в присутствии палладиевой черни как акцептора водорода. со+н2о=н.с он -»С022 (акц.). Основным моментом всего процесса в целом является по-мнению^Виланда дегидрирование, идущее с заметной скоростью только в присутствии специфических катализаторов-ферментов, действие к-рых направлено на освобождение активного Н. Если водород т. о. оторва лея-от молекулы гидрата, то он уже легко i-может быть" уловлен любым акцептором, будь то метилано-вая синь, альдегид или даже газообразный 02. Следовательно никакого активирования 02 воздуха О. ф. не требуется.и не происходит. Действие оксидаз, так же как и оксигг доредуказ, направлено на Н гидратов,. на их дегидрирование. Поэтому Виланд отрицает существование оксидаз как самостоятельной группы и предлагает все О. ф... объединить под одним названием «дегид-разы». Для подтверждения своего мнения Виланд произвел ряд опытов, имеющих целью показать, что типичные оксидазы содействуют окислению субстрата > и в отсутствии газообразного 02 при метиленовой сини как акцепторе Н. Наоборот, оксидоредуказы производят окисление, связанное с поглощением атмосферного 02. Однако-в своих/опытах Виланд;не имел дела с физиологически чистыми ферментами, и в употребляемых им препаратах одновременно могли находиться представители как той, так и другой группы-»'- О., ф. Дальнейшие исследования.показали, что при применении тщательно очищенных- ферментативных препаратов не удаетсяч'-повторить указанных: опытов, что конечно значительно понижает убедительность доводов Виланда. Отмеченное разногласие'в основных взглядах на природу и биол. значение О. ф. создает весьма сильное затруднение при изучении этого отдела энзимологии. Диаметрально противоположную по 'отношению к воззрениям Виланда точку "зрения'занимает Варбург, видящий первичный^ момент действия дыхательных ферментов в: активировании кислорода. ~Это активирование совершается под влиянием каталитически действующих органических соединений (а. отчасти быть может и свободных) тяжелых: металлов, гл. обр. железа, в меньшей мере-также меди, марганца и-др. Биологически доминирующее значение^ в качестве дыхательных ферментов (в том смысле, как этот термин употребляет- Варбург, т. е. активаторов кислорода) имеют комплексы железа с пирольными соединениями типа гемина „ в свою очередь связанные с определенными: органическими основаниями - (подобно тому как напр. в гемоглобине.гематин связан с-ос-новным белком—глобином).. Исключительными по изяществу опытами Фарбургу^ удалось даже получить спектр - поглощения дыхательного vфермента, не1 выделяя его как хим. индивидуум из «клетки (что. пока' еще не-представляется возможным). Этот спектр,. дающий главную -полосу поглощения в области около 4 300 *А, почти *в точности совпадает со спектрами искусственно получаемых соединений гемина а (лишь несколько сдвинут в красную сторону). Несомненно, что объяснение истинноголме-ханизма окислительных процессов в клетке следует искать в синтезе крайних воззрений Виланда (исключительное активирование водорода) и Варбурга (исключительное акти- еирование кислорода). К этому склоняется подавляющее большинство современных исследователей, и сам Варбург в одной из самых последних работ также признает «активирование субстрата» как один из возможных факторов биол. окислений. Такое синтезирующее представление сводится в основ-«ом к тому, что главным путем окислительных процессов в клетке является следующий: -активированный водород органических молекул (или их гидратов, по Виланду, или просто водород воды при схеме гидролитического окисления) через промежуточное участие акцепторов или переносчиков водорода (типа дыхательных пигментов или цит-рохома) реагирует с кислородом, активированным оксидазами или дыхательным ферментом Варбурга. Однако этот путь не является единственным. В ряде случаев био-.логич. окислений установлено образование «ерекиси водорода. Это может произойти -только в том случае, если акцептором водорода является молекулярный, не активиро-•вонный кислород: 2Н + 02203, между тем ясак активный, атомарный кислород дал бы ►образование воды. Повидимому с образованием перекиси водорода приходится считаться при большинстве биол. окислений. В то же время сами окислительные ферменты очень чувствительны к перекиси водорода, "быстро разрушаясь ею. Отсюда становится .ясным значение повсеместно распространенного фермента каталазы (см.), разлагающего перекись водорода на воду и молекулярный ■кислород, могущий снова быть использо-даанным клеткой. Кроме того перекись может быть разложена и пероксидазой с отщеплением активного кислорода, также идущего на новые окисления. Работы последнего времени (1931) установили факт чрезвычайно большого значения: оказалось, что последние два фермента, каталаза и перокси-.даза, являющиеся компонентами общей окислительной системы клетки, представляют •собой, как и дыхательный фермент Варбурга, железосодержащие пирольные дериваты, -близкие к гемину и дающие характерный спектр^ поглощения с главной полосой при 4 200 А. При этом интенсивность этой полосы идет приблизительно параллельно активности ферментного препарата. Содержание гемина даже в наиболее чистых препаратах •чрезвычайно мало, порядка 0,1—0,6%. Очевидно, что если энзиматическ. действие присуще именно указанным геминовым дериватам (а это уже сейчас можно утверждать почти с полной уверенностью), то ферментативная активность их (отличающаяся к тому же высокой специфичностью) оказывается примерно в 107 раз выше, чем у обычных железосодержащих пигментов (гемоглобина ш его производных). Номенклатура и классификация О. ф. крайне запутана и противоречива. Это обусловлено гл. обр. двумя обстоятельствами: во-первых номенклатура этой группы ферментов не подчинена какому-либо определенному принципу и носит довольно случайный характер. Поэтому нередко один и тот же •фермент фигурирует в литературе под несколькими различными названиями. Во-вторых только очень ограниченное число работ над О. ф. производилось с физиологически чистыми препаратами. В большин- стве случаев исследователи имели дело со сложными автолитическими смесями, тканевыми кашицами, убитыми ацетоном клетками микроорганизмов или даже просто со свеже вырезанными органами животных. Ясно, что в такого рода объектах окисление того или иного вещества может зависеть от совместного действия целого комплекса ферментов. Однако обычно оно приписывалось одному особому ферменту, специфичному для данного субстрата. Для ряда случаев уже в наст, время удалось показать, что это неправильно. Указанные «ферменты» не являются индивидуальными, а представляют собой смесь оксидаз иоксидоредуказ, совместное действие к-рых и вызывает ту или иную окислительную реакцию. Поэтому в дальнейшем изложении в основу классификации О. ф. кладется деление их на две группы: 1) оксидазы и 2) оксидоредуказы. Но т. к. из ряда смесей не удалось еще выделить индивидуальных ферментов и нам известно пока только их суммарное действие, в нек-рых случаях временно приходится сохранять старую терминологию и выделять эти ферменты в особую смешанную третью группу. I группа, оксидазы (истинные оксидазы, прямые оксидазы, аэрооксидазы, хро-мооксидазы)—ферменты, обусловливающие образование дыхательных пигментов. В основе действия этих ферментов лежит активирование кислорода. К этой группе принадлежат. 1.Фенолазы—ферменты, окисляющие кислородом воздуха разнообразные многоатомные фенолы, ароматические амины и иодистоводородную к-ту. Эти ферменты весьма широко распространены как в животных, так и в растительных клетках, где их можно обнаружить при помощи реакции с пирогаллолом. Однако выделение фенолаз в виде очищенных препаратов сопряжено со значительными трудностями в виду их нестойкости. Поэтому получение активных препаратов удается только при употреблении нек-рых, гл. обр. растительных, объектов (грибы Russula delica). На основании ряда данных Бах и Шода высказали предположение, что фенолава состоит из двух частей, из к-рых одна активирует молекулу 02 с образованием перекиси, а другая ускоряет окислительное действие возникающей при этом перекиси водорода.Первый компонент получил название оксигеназы, а второй, активирующий перекись водорода,—пероксидазы. Схематически действие фенолазы можно изобразить следующими уравнениями: 2) R—/\ — ОН Н—О R—/\ — О +        | ->                  | +2НаО KJ—он н—о \J—o Пероксидаза была обнаружена в ряде растительных и животных объектов и в отсутствие оксигеназы как самостоятельный фермент. 2. Пероксидазы являются наиболее хорошо изученными окислительными ферментами. Их действие вполне аналогично действию фенолаз. Но тогда, как последние активируют Оа воздуха, пероксидазы осуществляют окисление фенолов, аминов и пр. только за счет перекиси водорода. Пероксидазы являются весьма устойчивыми по отношению к различным внешним воздействиям и поэтому они легко могут быть получены из различных растительных и животных объектов. Особенно большое количество пероксидазы содержат корни и ростки высших растений. Из корня хрена Вялыптеттером (R. Willstatter) и его учениками (R. Ки1ш)и были получены наиболее чистые препараты пероксидазы, давшие возможность подойти к выяснению химической природы этого фермента. Весьма интересно, что пероксидазным действием обладает кра-1 сящее вещество крови — оксигемоглобин. Но даже тогда, когда он выделен в химически чистом виде, его действие является несравненно более слабым, чем действие растительных пероксидаз. 3. Тирозиназа—фермент, окисляющий при помощи свободного кислорода один из продуктов распада белков—тирозин Ог-оксифенил-а-аминопропионовая кислота). Под действием тирозиназы бесцветный водный раствор тирозина в присутствии кислорода воздуха окрашивается в красный, затем в коричневый, фиолетовый и черный цвета. После этого выпадает чернильно-чер-ный осадок меланина, и жидкость опять делается бесцветной. Реакция протекает с отщеплением аммиака и С02 (дезаминиро-вание аланиновой группы). Тирозиназа распространена менее, чем первые два указанных фермента. Однако ее можно обнаружить в ряде растительных и животных объектов. Особенно богата тирозиназой кожура картофеля. Окисление тирозина и образование из него меланина представляет ■сочетание идущих друг за другом реакций. Поэтому вряд ли тирозиназа является индивидуальным ферментом. Скорее всего она представляет смесь ферментов, но так как доминирующую роль здесь играют оксидазы, то возможно отнести ее к первой группе О. ф.—В дополнение к сказанному нужно отметить еще одну группу оксидаз, названную Дюбуа (R. Dubois) люцифера-зой. Действием этих ферментов обусловлено свечение ряда низших морских животных, насекомых и бактерий. Согласно данным указанного автора, здесь происходит ферментативное окисление кислородом воздуха особого вещества—люциферина. Однако реакция эта является далеко не изученной (см. Люминжценция). II группа — оксидоредуказы (редуктазы, дегидразы)—ферменты, ускоряющие окислительно-восстановительные процессы, одновременно идущие за счет элементов воды. 1. Пергидридаза (фермент Шардингера) является ферментом молока, из к-рого она может быть получена в виде очищенного препарата путем осаждения ацетоном. Пергидридаза осуществляет одновременно окисление и восстановление разнообразных органических и неорганических веществ. В частности в ее поисутствии окисляются различные альдегиды, амиды и аминокислоты. С этим обязательно должно быть сопряжено восстановление таких веществ, как напр. метилено-вая синь, нитраты, тиосоединения и пр. Окисление и восстановление идет за счет элементов воды, и поэтому реакция может происходить и в отсутствие газообразного 02. Атмосферный 02, напротив, даже замедляет эту реакцию, так как он постепенно разрушает фермент. В силу того что пергидридаза может одновременно окислять и восстанавливать альдегиды (реакция Кан-ниццаро), некоторые авторы рассматривают этот фермент как частный случай альде-гидаз.—2. Альдегид азы (альдегидра-зы) —. ферменты, катализирующие реакцию Канниццаро. Впервые действие этих ферментов было обнаружено при окислении салицилового альдегида в салициловую к-ту. Поэтому указан, фермент вначале получил название салицилазы. Однако в дальнейшем было установлено, что салицилаза может действовать и на другие альдегиды. При этом наряду с окислением одной молекулы альдегида в соответствующую к-ту другая молекула восстанавливается в спирт. Реакция успешно протекает и в отсутствие 02 воздуха, т. к. она идет за счет элементов воды. Наряду с восстановлением второй молекулы альдегида могут восстанавливаться и другие вещества, в частности, как это показал Нейберг (С. Neuberg), кетоны, нитросоединения, тиосоединения и пр. Аль-дегидазы чрезвычайно распространены как в животном, так и в растительном мире. Особенно ими богаты печень животных и дрожжи. Указанные ферменты играют исключительно важную роль в метаболизме веществ в живой клетке. К сожалению они еще очень плохо изучены. — 3. Альдегидмута- 3  ы—ферменты, катализирующие реакцию, получившую название «внутренней Канниццаро» (Нейберг). При этой реакции осуществляется одновременное окисление и восстановление двух атомных групп одной и той же молекулы, идущее за счет элементов воды. Наиболее хорошо изученным примером этой реакции может служить превращение метилглиоксаля в молочную к-ту: СНа             СНа I                                          I со+н2->снон , сно о сооы По Нейбергу, эта реакция осуществляется благодаря действию фермента, который он назвал кетон-альдегидмутаза (глиоксалаза Декина). ШгруппаО.ф. (смешанная группа). Сюда относятся: 1.Алкогольоксида-зы (алкогольдегидразы) — ферменты, окисляющие спирты в соответствующие альдегиды. Эти последние затем альдегидазами переводятся в к-ты. Окисление осуществляется за счет 02 воздуха, но т. к. в состав этих ферментов входят оксидоредуказы, окисление, может итти и в присутствии таких акцепторов Н, как напр. метилено-вая синь. Впервые алькогольоксидазы были получены Бухнером (Е. Buchner) в виде умерщвленных ацетоном уксуснокислых бактерий. Позднее этот фермент был найден Бателли (F. Battelli) и Штерн в тканях животных. Особенно им богата печень лошади.—2. Ацидоксидазы (ацидоде-гидразы)—ферменты, окисляющие оксики-слоты. Впервые были. обнаружены Бателли и Штерн в мышцах и других тканях животных. Наиболее детальному изучению под- вергся фермент, действующий на янтарную кислоту (сукциноксидон Бателли и Штерн или сукциндегидраза T.Thunberg'a).—3. П у-риноксидазы (пуриндегидразы)—ферменты, окисляющие продукты распада нуклеиновых кислот^—пуриновые основания. Возникающие при гидролизе нуклеиновой кислоты аденин и гуанин под влиянием ги-дролитич. ферментов превращаются в гипо-ксантин и ксантин. На эти тела и действуют пуриноксида'зы. Напр. ксантиногазидаза окисляет гипоксантин в ксантин, а последний в мочевую к-ту. Мочевая к-та под влиянием уриказы окисляется далее в аллантоин. Пу-риноксидазы найдены только в животных организмах.                А. Опарин, Е. Энгепьгардт. Исследование клеток на присутствие в их протоплазме. О. ф. имеет большое значение как в клин, лаборатории,так и при пат.-гист. изучении тканей. Оно применяется главным обр. для выявления клеток костномозгового (миелоидного) типа, к-рые в отличие от элементов лимфоидного и гистиоидного характера содержат в протоплазме О. ф. Потребность диференцировать при помощи реакций на О. ф. клетки в клинике возникает при необходимости выяснить тип лейкемии (см.) в тех случаях, когда в основе последней лежит увеличение числа белых элементов, морфологически неясных в смысле их натуры. Реакции на О. ф. делают в мазках, напр. крови, фиксированных лучше всего в парах формалина, и в срезах, сделанных на замораживающем микротоме; кусочки тканей также лучше всего фиксировать в формалине. Из реакций на о к с и д а з у наиболее употребительна реакция Вин-клер-Шульце (Winkler, Schultze), основой к-рой является воздействие на ткань растворов а-нафтола и диметилпарафенилен-диамина. Эту реакцию по предложению Грефа (Graff) принято сокращенно называть реакцией нади (Nadi-Reaktion). По Винклер-Шульце, растворы нафтола и диме-тилпарафенилендиамина употребляют врозь, по Грефу—в одной общей смеси. По способу Винклер-Шульце раствор а-нафтола готовят таким образом, что 1 г а-нафтола растворяют в 100 см3 дестил. вОды, доводя последнюю до кипения и прибавляя по каплям чистого едкого кали до растворения а-нафтола (обычно достаточно около 1 см? едкого кали). Диметилпарафенилендиамин растворяют в количестве 1% в дестил. воде при комнатной t°. Мазки или срезы опускают на неск. минут сначала в раствор нафтола, а потом непосредственно в раствор диметилпара-фенилендиамина; затем—промывка в дестил. воде. Мазки подсушивают и рассматривают с иммерсионной системой; срезы исследуют в воде или глицерине или же через спирт и ксилол заключают в канадский бальзам. Ядра могут быть подкрашены кармином. По способу Грефа срезы погружают на 10—15 мин. в смесь равных частей 1 %-ного . водного раствора а-нафтола и 0,2%-ного водного раствора дим ети л параф ени лен диамина. После ополаскивания срезов в воде их кладут на 2—3 минуты в Люголевский раствор иода. Промывают в воде, к к-рой прибавляют на 10 см? 5 кап. насыщенного раствора углекислого лития. После этого подкрашивают ядра квасцовым кармином, срезы промывают и заключают в глицерин- желатину. При реакциях нади присутствие-оксидазы выявляется образованием йндофе-ноловой сини в виде темносиних зерен (при способе Грефа буроватых от иода). Реагенты* для реакции нади нестойки; их надо хранить в темных склянках и часто возобновлять.—Р еакция на,пероксидазу делается при помощи бензидина. 1 з бен-зидина растворяют в 100 см? водопроводной воды при встряхивании; в этот раствор при его употреблении прибавляют немного (1—Z капли) продажной перекиси водорода. Мазки и срезы в этой смеси держат несколько-минут, после чего промывают в воде, подкрашивают ядра гематоксилином или краской Гимза; после промывки мазки высушивают, а срезы через спирт и ксилол заключают в бальзам. Зерна пероксидазьр желто^бурые. Надо заметить, что для практических целей реакцию нади на оксидазу и реакцию с бензидином на пероксидазу можно считать равнозначащими, т. к. в тканевых элементах при расщеплении фенолов под влиянием перекиси водорода образуются продукты, одинаковые с теми, которые дают реакции на оксидазу. а. Абрикосов., Лит.: Бах А., Химизм дыхательных процессов,. JK. Рус. физ.-хим. об-ва, часть хим., т. XLIV, в. 2, 1912; Вальдшмидт-Лейтц Э., Ферменты,. их действие и свойства, Л., 1929; В а р б у р г О., О хим. природе дыхательного фермента, Усп. эксп. биологии, 1928, № 3; Гопкинс, О современных взглядах на механивм окислительпых процессов, Усп. эксп. биол., т. V, № 3—4, 1926; Палладии В., Значение воды в процессе спиртового брожения и дыхания (сборник статей, поев. К. А. Тимирязеву, М., 1916); Bat е 1 1 i F. u. S t er n L.,Die Oxydationsfer-mente,Erg. d. Physiologie.B. XII, 1912; Katsun lima S.,Intrazellulare Oxydation u. Indophenolblausyn-these, Jena, 1924; L о e 1 e W., Oxydierende u. redu-zierendeZellsubstanzen,Erg.d.allg.Pathologie,B.XVІ, T. 2, 1912; он же, Untersuchungen tiber oxydierende Substanzen, Virchows Archiv, B. CCLXI—CCLXII, 1926, B. CCLXIV, 1927; Oppenheimer C, Die Fermente u. ibre Wirkungen, B. II, Lpz., 1926; Thunberg Т., Der jetzige Stand der Lehre vom, blol. Oxydationsmechanismus (Hndb. der Biochemie, hrsg. v. Oppenheimer, Erganzungsband, p. 245, Jena,. 1931); W i e 1 a n d H., Cfber denMechanismus derOxv-dationsvorgange, Erg. d. Physiologie, B. XX, 1922. См.. также лит. к ст. Дыхание, отдел Тканевое дыхание.

Большая медицинская энциклопедия. 1970.

Игры ⚽ Поможем решить контрольную работу

Полезное


Смотреть что такое "ОКИСЛИТЕЛЬНЫЕ ФЕРМЕНТЫ" в других словарях:

  • Ферменты — (от лат. fermentum – закваска)         энзимы, специфические белковые катализаторы, присутствующие во всех живых клетках. Почти все биохимические реакции, протекающие в любом организме и в своём закономерном сочетании составляющие его Обмен… …   Большая советская энциклопедия

  • ФЕРМЕНТЫ — органические вещества белковой природы, которые синтезируются в клетках и во много раз ускоряют протекающие в них реакции, не подвергаясь при этом химическим превращениям. Вещества, оказывающие подобное действие, существуют и в неживой природе и… …   Энциклопедия Кольера

  • Оксидазы — окислительные ферменты. В настоящее время найдено очень много разнообразных окислительных ферментов, как растительного, так и животного происхождения. В большинстве случаев каждый из них исполняет свою определенную функцию. Напр., тирозиназа,… …   Энциклопедический словарь Ф.А. Брокгауза и И.А. Ефрона

  • оксидазы — (гр. oxys кислый) окислительные ферменты растительного и животного происхождения; играют важную роль в жизненных процессах. Новый словарь иностранных слов. by EdwART, , 2009. оксидазы [< гр. кислый] – окислительные ферменты растительного и… …   Словарь иностранных слов русского языка

  • Аэробные спорообразующие бактерии. Род бациллюс (Bacillus) —         Аэробные спорообразующие бактерии составляют довольно обширную группу микроорганизмов. Они широко распространены в природе и играют большую роль в разнообразных биологических процессах. С использованием этих бактерий в промышленности… …   Биологическая энциклопедия

  • Медицина — I Медицина Медицина система научных знаний и практической деятельности, целями которой являются укрепление и сохранение здоровья, продление жизни людей, предупреждение и лечение болезней человека. Для выполнения этих задач М. изучает строение и… …   Медицинская энциклопедия

  • КРОВЬ — КРОВЬ, жидкость, заполняющая артерии, вены и капиляры организма и состоящая из прозрачной бледножелтоват. цвета плаз мы и взвешенных в ней форменных элементов: красных кровяных телец, или эритроцитов, белых, или лейкоцитов, и кровяных бляшек, или …   Большая медицинская энциклопедия

  • КЛЕТКА — элементарная единица живого. Клетка отграничена от других клеток или от внешней среды специальной мембраной и имеет ядро или его эквивалент, в котором сосредоточена основная часть химической информации, контролирующей наследственность. Изучением… …   Энциклопедия Кольера

  • гемопротеиды — сложные окрашенные белки, содержащие в качестве небелкового компонента гем. К гемопротеидам относятся гемоглобин, миоглобин, некоторые окислительные ферменты. * * * ГЕМОПРОТЕИДЫ ГЕМОПРОТЕИДЫ, сложные окрашенные белки, содержащие в качестве… …   Энциклопедический словарь

  • ОКИСЛЕНИЕ — ОКИСЛЕНИЕ, химическая реакция присоединения кислорода или отнятия водорода. Для ионных процессов общепринята более расширенная формулировка: О. есть увеличение положительной валентности (заряда> или уменьшение отрицательной валентности… …   Большая медицинская энциклопедия


Поделиться ссылкой на выделенное

Прямая ссылка:
Нажмите правой клавишей мыши и выберите «Копировать ссылку»